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MONOZUKI’s blog

STAP細胞にかかわる特許請求の範囲を読む

【請求項23】~【請求項25】

【請求項23】  機械的刺激が、剪断ストレス または/および高圧に細胞を曝露することを含む、請求項13記載の方法。

The method of claim 13, wherein the mechanical stimulus comprises exposing the cell to shear stress or/and high pressure.

【請求項24】  機械的刺激が、細胞のサイズより小さな開口を有する少なくとも1つのデバイスを通して細胞を通過させることを含む、請求項23記載の方法。

The method of claim 23, wherein the mechanical stimulus comprises passing the cell through at least one device with a smaller aperture than the size of the cell.

【請求項25】  機械的刺激が、漸進的により小さな開口を有するいくつかのデバイスを通して細胞を通過させることを含む、請求項23記載の方法。

The method of claim 23, wherein the mechanical stimulus comprises passing the cell through several devices having progressively smaller apertures.

 

>>細胞のトリチュレーションが記載されている。

 

明細書段落【0064】

 多能性細胞の生成を誘導する機械的刺激は、膜の完全性を機械的に破壊する、物質また は表面の細胞膜との任意の形態の接触を含み得る。機械的刺激は、細胞を剪断ストレスお よび/または高圧に曝露することを含み得る。機械的刺激の例示的な形態はトリチュレー ションである。トリチュレーションは、摩擦を介して粒子の表面を研磨および/または摩減するプロセスである。細胞のトリチュレーションのためのプロセスの非限定的な例は、 デバイスを通して細胞を通過させることであり、ここで、デバイスは細胞のサイズより小 さな開口を有する。例えば、真空圧および/または流体の流れによって、ピペットの内部 空間の少なくとも一部が細胞の直径より小さな直径を有するピペットを通して、細胞を通 過させることができる。いくつかの実施態様において、細胞のサイズより小さな開口を有 する少なくとも1つのデバイスを通して細胞を通過させる。いくつかの実施態様において 、漸進的により小さな開口を有するいくつかのデバイスを通して細胞を通過させる。いく つかの実施態様において、5分間以上、例えば、5分間、10分間、20分間、30分間 、または60分間細胞をトリチュレーションすることができる。いくつかの実施態様にお いて、50μmの内径を有するパスツールピペットを通して細胞を通過させることによって、細胞をトリチュレーションすることができる。いくつかの実施態様において、50μ mの内径を有するパスツールピペットを通して20分間細胞を通過させることによって、 細胞をトリチュレーションすることができる。

[0088] Mechanical stimuli that induce the generation of pluripotent cells can include any form of contact of a substance or surface with the cell membrane which will mechanically disrupt the integrity of the membrane. Mechanical stimulus can comprise exposing the cell to shear stress and/or high pressure. An exemplary form of mechanical stimulus is trituration. Trituration is a process of grinding and/or abrading the surface of a particle via friction. A non-limiting example of a process for trituration of a cell is to cause the cell to pass through a device wherein the device has an aperture smaller than the size of the cell. For example, a cell can be caused, by vacuum pressure and/or the flow of a fluid, to pass through a pipette in which at least part of the interior space of the pipette has a diameter smaller than the diameter of the

cell. In some embodiments, the cell is passed through at least one device with a smaller aperture than the size of the cell. In some embodiments, the cell is passed through several devices having progressively smaller apertures. In some embodiments, cells can be triturated for 5 or more minutes, e.g. 5 minutes, 10 minutes, 20 minutes, 30 minutes, or 60 minutes. In some embodiments, the cells can be triturated by passing them through a Pasteur pipette with an internal diameter of 50 μm. In some embodiments, the cells can be triturated by passing them through a Pasteur pipette with an internal diameter of 50 μm for 20 minutes.